Строк виконання, днів: 1-2

Термін виконання, днів: 1-2 днів

Код дослідження: Е29

Антигени системи групи крові Rh закодовані двома генами: RHD та RHCE. RHD кодифікує антиген D, тоді як RHCE кодифікує антигени Cc та Ее. Антиген d використовується для відмітки відсутності антигену D. RHD та RHCE кодують схожі поліпептиди, які на мембрані еритроцитів формують комплекс із глікопротеїном, що зв'язує Rh. Функція антигенів Rh остаточно невідома, хоча, враховуючи фенотип клітин Rh 0, передбачається, що антигени Rh можуть відігравати структурну роль мембрані еритроцитів.

Структура антигенів Rh передбачає наявність транспортних білків, а глікопротеїн, пов'язаний з Rh, може грати певну роль транспорті аміаку. Існують 45 антигенів, які були віднесені до системи груп крові Rh, серед яких найбільш поширеними та важливими є D, C, с, E і е, але можливо стати аллоімунними на антигени C, с, E і е при переливанні крові та вагітності, але вони набагато менші імуногени, ніж D. Менш ніж 3% від загального населення, схильного до дії антигенів C, с, E, е стають алоімунними, тому передтрансфузійне тестування зазвичай не проводиться на ці антигени. Після антигенів, А і антиген D свідчить про найвищої імуногенності антигену (в 20 разів вище, ніж у більшості інших Rh-антигенів). При проведенні гемотрансфузії D-позитивних еритроцитів майже 80% від D-негативних реципієнтів спричиняють утворення анти-D-антитіл. До того ж, анти-D імунізація сприяє подальшому синтезу антитіл порівняно з іншими антигенами в рамках групи крові або за межами системи Rh. Також антиген D залучено у 95% випадків гемолітичної хвороби новонароджених. Людина вважається "резус позитивним", якщо його еритроцити виражені антигеном D, а термін "резус негативний" відноситься до випадку, коли відсутня антиген D. Відсутність антигену зустрічається у 15-17% людей білої раси і рідше – в інших груп населення. У «білих людей» відсутність антигену D пов'язані з делецією гена RhD, тоді як в азіатів і афроамериканців пов'язані з інактивацією генів, а чи не їх делецією. Деякі еритроцити, що несуть D-антиген, вимагають тривалої інкубації з анти-D реагентом для появи реакції аглютинації. Ці еритроцити вважаються позитивним антигеном D, і описані як рецесивний D, раніше відомі як Du (менш ніж в 1% випадків). Вважається, що фенотип рецесивного гена D з'являється в ході одного з трьох механізмів:

1) Спадкова передача RHD гена, що кодує білок D з ослабленою антигенною експресією. Найбільш поширена серед чорношкірого населення та пов'язана з гаплотипом DCE, а серед білого населення пов'язана з гаплотипами DCе або DсE.

2) Взаємодія гена D з іншими генами. Люди з геном D у транспозиції щодо гена С (наприклад, DсE / Се) представляють ослаблену експресію гена D.

3) Спадкова передача гена, що кодує антигенний комплекс D, в якому відсутні певні епітопи, називається і неповним D. Дані особи можуть виробляти анти-D у разі їхньої трансфузії з D-позитивними еритроцитами. Серед них DVI представляє щонайменше епітопів і дані особи представляють найвищий ризик при імунізації, але менш значущий, ніж D-негативні особи. Донори D-рецесивного гена повинні вважатися Rh(D)-позитивними і важливо, що вони не повинні бути визначені помилково як «Rh негативні», тому що D-слабкий антиген може викликати імунну відповідь, якщо перелити через кров Rh-негативним особам . Особи з D-слабким можуть бути перелиті з Rh-позитивною кров'ю (виняток - DVI), а вагітні не потребують профілактики з анти-D імуноглобуліном. У разі використання відповідного моноклонального анти-D реактиву більшість антигенних детермінантів, включені перш ніж Du, не повинні відрізнятися від D-гену за звичайних умов. Фенотип Rh0 з'являється, коли еритроцити не виявляють властивостей Rh-антигена щонайменше двома можливими механізмами: спадкова передача гена, який кодує глікопротеїн, що зв'язує анормальний Rh, з нормальними генами RHD та RHCE (або спадковість) певної мутації гена RHCE пов'язана з. Фенотип Rh0 пов'язаний структурними аномаліями еритроцитів та гемолізом. Ці особи виробляють алоантитіла, що взаємодіють усіма еритроцитами, крім Rh0. Анти Rh0 антитіла виникають при алоімунізації внаслідок несумісних трансфузій Rh-системи або вагітності.Дуже рідко можуть вироблятися природні антитіла в системі Rh без відомих антигенних стимуляторів (анти-Е, анти-С№ ), що у більшості випадків не відповідають з точки зору клініки. Також при імунних гемолітичних анеміях аутоантитіла часто володіють анти-активністю. Більшість анти-І-антитіл є IgG, особливо IgG1 і IgG3 (неповні аглютинини), хоча деякі можуть бути IgM і зазвичай не активують комплемент. Аглютинуючі антитіла типу IgM є транзиторними і з'являються на початку імунізації. Найбільш поширеними є анти-антитіла, які можуть провокувати гемолітичну хворобу новонароджених та тяжкі гемолітичні трансфузійні реакції. Їх частота значно знизилася одночасно з анти-D профілактикою у Rh-негативних вагітних із резус-позитивним плодом. Анти-C-, C-, E-антитіла пов'язані з гемолітичною хворобою новонароджених та легкими гемолітичними трансфузійними реакціями. Типування резус-фактора еритроцитів проводиться за допомогою анти-D моноклональних сироваток, які взаємодіють у солоному середовищі і містять як людські IgM (які не є-категорією Dvi), так і поліклональні IgG-антитіла, які можуть бути використані і в антиглобуліновому тесті на D -Рецесивний фактор. Під час підготовки анти D-сироватки додається людський або бичачий сироватковий альбумін, який змінює діелектричну константу середовища та сприяє аглютинації резус-позитивних еритроцитів.

 

Підготовка пацієнта: Здача крові натще.

Матеріал: Венозна кров.

Інтерферуючі фактори:

Хибнопозитивні реакції:

1. Еритроцити у вигляді стовпчика монет;
2. Поліаглютинація;
3. Гемолітичні анемії з тепловими аутоантитілами (наявність антитіл IgG на поверхні еритроцитів) — повторне визначення групи з реагентом, з якого видалений альбумін, який містить анти-D аглютинуючі антитіла, здатні аглютинувати з еритроцитами в сольовій суспензії (анти-D сольовий).

Хибнонегативні реакції:

1. Гемолітична анемія новонароджених (блокування D-антигенних сітусів материнськими антитілами);
2. У осіб з рецесивним Rh D геном можлива слабка та пізня аглютинація. 

Стабільність проби: зразок зберігається 48 годин за температури 2–8 °C.

Метод: Визначення групи крові системи АВ0 моноклональними антитілами, визначення резус-фактора за допомогою моноклонального реагенту (Цоліклон анти-D Супер), (реакція прямої гемаглютинації).

Тест-системи: набір ЕРІТРОТЕСТ^тм-ЦОЛІКЛОНИ Анти-А, Анти-В та Анти-АВ, анти-D Супер), ТОВ «ГЕМАТОЛОГ» (Москва).

Основні показання до призначення аналізу:

1. Перед гемотрансфузією;
2. Перед деякими інвазивними або хірургічними процедурами з можливими геморагічними ускладненнями, які можуть потребувати переливання крові;
3. Допологовий та післяпологовий імуногематологічний моніторинг матері та дитини;
4. Донори крові.

Інтерпретація результатів: повне визначення фенотипу Rh призначається донорам крові, його слід враховувати при переливанні крові у дівчаток та жінок у період менопаузи, у хворих, які постійно піддаються трансфузіям та у реципієнтів невідповідних антиеритроцитарних антитіл.

• Rh(D)-позитивні, якщо отримані результати, ясно позитивні з обома анти-D тест-сироватками, а аутоконтроль - негативний;
• Rh(D)-негативні, якщо отримані явно негативні результати з обома анти-D тест-сироватками, незалежно від результатів аутоконтролю.

 

Додаткове тестування є обов'язковим, якщо отримані слабко позитивні результати або суперечливі результати з тест-сироватками, а самоконтроль – негативний, а також якщо отримані позитивні результати з обома тест-сироватками, а аутоконтроль – позитивний.

У донорів, якщо первинний тест Rh D є негативним, необхідно проводити друге тестування для виявлення рецесивного D-фактора (це не є обов'язковою процедурою для реципієнтів крові, яким потрібно провести переливання крові з резус-негативним фактором). До того ж визначення наявності рецесивного D-фактору у вагітних жінок виключає непотрібне лікування анти-D імуноглобуліном. Перед тим, як визначити пацієнта як D-рецесивного, необхідно встановити факт, що хворому не проводилося останнім часом переливання крові з Rh+ еритроцитами.